"ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕПИЩЕВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ СУДАН I, СУДАН II, СУДАН III, СУДАН IV И PARA RED В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВКАХ К ПИЩЕ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.1.2483-09" (УТВ. ГЛАВНЫМ ГОСУДАРСТВЕННЫМ САНИТАРНЫМ ВРАЧОМ РФ 05.02.2009)

архив

-Назад-



УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной

службы по надзору в сфере

защиты прав потребителей

и благополучия человека,

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

5 февраля 2009 г.



Дата введения:

с момента утверждения



4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ



ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕПИЩЕВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ СУДАН I, СУДАН II,

СУДАН III, СУДАН IV И PARA RED В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВКАХ К ПИЩЕ



МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.1.2483-09



1. Методические указания разработаны ГУ НИИ питания РАМН (академик РАМН В.А.Тутельян, к.т.н. В.Г.Байков, к.х.н. В.В.Бессонов, Ю.В.Ведищева, к.ф.н. О.И.Передеряев, Е.П.Хромченкова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 3 от 25.12.2008).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 05.02.2009.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.



Введение



Красители Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) (далее - Судан I-IV и Para Red) в сферах экономики используются при производстве дизельного топлива, в легкой промышленности для окрашивания тканей, а также при проведении биохимических исследований для окрашивания препаратов, и относятся к непищевым красителям.

Необходимость определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред) обусловлено их использованием при фальсификации специй и пряностей, а также продуктов их переработки, БАД к пище, изготовленных с использованием специй и пряностей, и других пищевых продуктов, в состав которых входят специи и пряности, с целью придания им более интенсивной окраски.



1. Общие положения и область применения



1.1. Настоящие методические указания устанавливают методику определения возможного присутствия непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в специях, пряностях и продуктах их переработки, а также в биологически активных добавках к пище (БАД) и других пищевых продуктов (в состав которых входят специи и пряности).

1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящиеся в обращении на территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1.3. Присутствие непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах в пределах обнаружения данным методом является основанием для запрещения продукции к реализации.



2. Краткая характеристика красителей Cудан I, Cудан II,

Cудан III, Cудан IV и Para Red (Пара Ред)



Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) являются синтетическими непищевыми красителями, практически нерастворимыми в воде, хорошо растворимыми в органических растворителях (хлороформе, ацетоне, эфире), и имеющих интенсивную окраску от оранжевого до ярко-красного цвета. Структура непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведена на рис. 1 (не приводится).



                              R1      R2      R3
    Судан I                   H       H       H
    Судан II                  H       CH3     H
    Судан III                 H       H       Ph-N=N-
    Судан IV                  CH3     H       o-CH3-Ph-N=N-
    Para Red (Пара Ред)       H       H       NO2


Рис. 1 Структура непищевых красителей Судан I-IV

и Para Red (Пара Ред)



Рисунок не приводится.



3. Принцип метода определения красителей Судан I-IV

и Para Red



Обнаружение и определение содержания непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред) проводится методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с диодно-матричным детектированием (при длине волны 504 нм). В качестве арбитражного метода используют метод ВЭЖХ с масс-детектированием (по молекулярным и дочерним ионам, - см. таблицу 1).



Таблица 1



Параметры масс-детектирования представлены



----------------+----------------+------------+--------------------¬
¦ Наименование  ¦  Молекулярные  ¦   Энергия  ¦ Основные дочерние  ¦
¦               ¦   ионы, m/z    ¦ разрушения ¦     ионы, m/z      ¦
+---------------+----------------+------------+------+-------+-----+
¦               ¦        +       ¦            ¦      ¦       ¦     ¦
¦Para Red       ¦294 (M+H )      ¦     0,9    ¦ 277  ¦  156  ¦  -  ¦
+---------------+----------------+------------+------+-------+-----+
¦               ¦        +       ¦            ¦      ¦       ¦     ¦
¦Судан-I        ¦249 (M+H )      ¦     1,0    ¦ 232  ¦  156  ¦  -  ¦
+---------------+----------------+------------+------+-------+-----+
¦               ¦        +       ¦            ¦      ¦       ¦     ¦
¦Судан-II       ¦277 (M+H )      ¦     1,2    ¦ 260  ¦  156  ¦ 120 ¦
+---------------+----------------+------------+------+-------+-----+
¦               ¦        +       ¦            ¦      ¦       ¦     ¦
¦Судан-III      ¦352 (M+H )      ¦     1,2    ¦ 197  ¦  336  ¦ 156 ¦
+---------------+----------------+------------+------+-------+-----+
¦               ¦        +       ¦            ¦      ¦       ¦     ¦
¦Судан-IV       ¦382 (M+H )      ¦     1,2    ¦ 224  ¦  364  ¦ 156 ¦
L---------------+----------------+------------+------+-------+------


4. Средства измерения, материалы и реактивы



- Высокоэффективный жидкостной хроматограф.

- Хроматографическая колонка C18, 5мю, 4,6x250 мм.

- Ультразвуковая баня.

- Весы лабораторные общего назначения с пределом взвешивания 100 г и погрешностью + 0,0001 г.

- Дистиллятор.

- Установка для фильтрования и дегазирования подвижной фазы.

- pH-метр лабораторный.

- Центрифуга лабораторная ОПН-8 8000 об./мин.

- Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

- Пипетки 2-1-2-1 или 1-1-2-1, 2-1-2-10 или 2-2-2-10 или 3-2-2-10 по ГОСТ 29227.

- Колбы мерные К 1-50-1, К 1-50-2 по ГОСТ 1770-74.

- Вода дистиллированная.

- Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

- Тетрагидрофуран для жидкостной хроматографии.

- Трифторуксусная кислота квалификации "ОСЧ".

- Ацетон квалификации "ХЧ".



5. Определение содержания Суданов I-IV и Para Red

методом высокоэффективной жидкостной хроматографии



5.1. Подготовка стандартных растворов



Навеску стандартного вещества около 0,02 г (с точностью 0,0001 г) помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 30 мл 95% этанола, интенсивно встряхивают, при необходимости озвучивают на ультразвуковой бане до полного растворения вещества. После этого объем доводят до метки 95% этанолом (основной раствор). В мерную колбу на 50 мл помещают 1 мл основного раствора и доводят объем до метки 95% этанолом (рабочий раствор). Полученный рабочий раствор фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Приготовленные стандартные растворы хранят в прохладном месте в течение 1 месяца.



5.2. Подготовка проб для анализа



Около 1,0 г (точная навеска) образца помещают во флакон, объемом 20 мл с завинчивающейся крышкой, добавляют 10 мл ацетона, интенсивно встряхивают в течение 2 минут и озвучивают на ультразвуковой бане в течение 5 минут. После озвучивания образец снова встряхивают и центрифугируют на 6000 об./мин. После центрифугирования супернатант отбирают и исследуют. При необходимости отобранный супернатант фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

При подготовке контрольных образцов указанным способом извлекается более 95% добавленного количества каждого из исследуемых красителей.



5.3. Приготовление подвижной фазы



При постоянном перемешивании к бидистиллированной воде добавляют по каплям трифторуксусную кислоту до pH = 2,4 и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Подвижная фаза хранится в холодильнике при температуре 2-8 град. C не более 3 месяцев.



5.4. Проведение анализа ВЭЖХ



Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения со временем удерживания стандарта красителя, УФ и видимого спектра. Для подтверждения рекомендуется сравнивать также молекулярные массы каждого компонента и его дочерних ионов.

Идентификация красителей Судан I-IV и Para Red только по времени удерживания не будет являться достоверной, ввиду сложного матрикса исследуемых объектов, и наличия природных компонентов, обладающих сходными спектральными характеристиками и хроматографическим поведением.



5.5. Условия хроматографического анализа



Колонка 5u C18(2), 5мю, 4,6x250 мм

Приготовление подвижной фазы: бидистиллированную воду доводят трифторуксусной кислотой до pH 2,4 (мл на 1 л бидистиллированной воды).

Подвижная фаза: смесь ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 (Б). Оптимальным является градиентное элюирование смесью ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 (Б): 0 мин. - 80% (А), 10 мин. - 98%(А) (градиент линейный), 20 мин. - 98%(А), 21 мин. - 80%(А). Регенерация колонки занимает не менее 9 мин. Общее время анализа составляет 30 минут.

В случае использования только диодно-матричного детектора вместо бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 допускается использование бидистиллированной воды. Также возможно использование изократического элюирования смесью ацетонитрила - бидистиллированной воды с содержанием ацетонитрила 90-95% (в зависимости от параметров колонки).

Для полной регенерации колонки следует использовать подвижную фазу на основе тетрагидрофурана, обладающего такой же элюирующей силой, как и ацетон.

Скорость подачи подвижной фазы: 1,0 куб. см/мин.

Детектирование: лямбда = 504 нм.

Объем вводимой пробы 5 мкл.

Порядок выхода и параметры количественного определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведены в таблице 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV и Para Red представлен на рисунке 2 (не приводится).

Проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается, поскольку они являются не пищевыми веществами, и их присутствие в пределах обнаружения данного метода является основанием для запрещения продукции к реализации. Пределы обнаружения красителей Судан 1-4 и Пара Ред приведены в Таблице 2.



Таблица 2



Пределы обнаружения непищевых красителей Судан I-IV

и Пара Ред в специях, пряностях, продуктах их

переработки и БАД к пище



-----+--------------+---------------------+------------------¬
¦ N  ¦ Наименование ¦Предел обнаружения на¦Предел обнаружения¦
¦    ¦  красителя   ¦  диодной матрице,   ¦на масс-детекторе,¦
¦    ¦              ¦       мг/кг         ¦       мг/кг      ¦
+----+--------------+---------------------+------------------+
¦ 1. ¦Para Red      ¦        0,5          ¦       0,5        ¦
+----+--------------+---------------------+------------------+
¦ 2. ¦Судан-I       ¦        0,5          ¦       0,5        ¦
+----+--------------+---------------------+------------------+
¦ 3. ¦Судан-II      ¦        0,5          ¦       0,5        ¦
+----+--------------+---------------------+------------------+
¦ 4. ¦Судан-III     ¦        0,5          ¦       0,5        ¦
+----+--------------+---------------------+------------------+
¦ 5. ¦Судан-IV      ¦        0,5          ¦       0,5        ¦
L----+--------------+---------------------+-------------------


Количественное определение <*>



--------------------------------

<*> Проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается.



Количественное определение проводят абсолютной градуировкой.

Содержание красителей Судан I-IV и Para Red проводят по следующей формуле:



                                   S2 x C1 x V
                        C, мг/кг = -----------,
                                     S1 x m


где:

C, мг/кг - содержание красителя, мг/кг.

C1 - концентрация красителя в стандартном растворе, мкг/мл.

S1 - площадь пика красителя в стандартном растворе.

S2 - площадь пика красителя в определяемом образце.

V - объем раствора образца, мл.

m - масса навески, г.



Таблица 3



Основные метрологические показатели



----+------------+------------------------+------------------------¬
¦ N ¦Наименование¦ Граница относительной  ¦ Стандартное отклонение ¦
¦   ¦            ¦погрешности (+/- дельта)¦повторяемости (сигма ) %¦
¦   ¦            ¦     в % при Р = 0,95   ¦                    r   ¦
+---+------------+------------------------+------------------------+
¦1. ¦Para Red    ¦          2,1           ¦          3,2           ¦
+---+------------+------------------------+------------------------+
¦2. ¦Судан-I     ¦          3,6           ¦          3,5           ¦
+---+------------+------------------------+------------------------+
¦3. ¦Судан-II    ¦          2,8           ¦          3,8           ¦
+---+------------+------------------------+------------------------+
¦4. ¦Судан-III   ¦          3,3           ¦          4,9           ¦
+---+------------+------------------------+------------------------+
¦5. ¦Судан-IV    ¦          3,9           ¦          4,3           ¦
L---+------------+------------------------+-------------------------


Таблица 4



Параметры определения непищевых красителей Судан I-IV

и Para Red



----+---------------+--------------¬
¦ N ¦ Наименование  ¦    Время     ¦
¦   ¦               ¦ удерживания, ¦
¦   ¦               ¦     мин.     ¦
+---+---------------+--------------+
¦1. ¦Para Red       ¦     6,2      ¦
+---+---------------+--------------+
¦2. ¦Судан-I        ¦     7,5      ¦
+---+---------------+--------------+
¦3. ¦Судан-II       ¦     10,9     ¦
+---+---------------+--------------+
¦4. ¦Судан-III      ¦     12,9     ¦
+---+---------------+--------------+
¦5. ¦Судан-IV       ¦     15,5     ¦
L---+---------------+---------------


Рис. 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV

и Para Red



Рисунок не приводится.









-Главная-


Навигация

Разное

Новости от партнеров

Рейтинг

Rambler's Top100
Рейтинг@Mail.ru
 

 

Архив документов

2009 2008 2007 2006 2005 2004 2003 2002 2001 2000 1999 1998 1997 1996 1995 1994 1993 1992 1991 1990 1928-1989